La setmana passada vam compartir diverses consideracions per utilitzar l'electroforesi de membrana d'acetat de cel·lulosa i avui acabarem aquest tema per a la vostra referència.
Selecció de Concentració tampó
La concentració de tampó utilitzada en l'electroforesi de membrana d'acetat de cel·lulosa és generalment inferior a la que s'utilitza en l'electroforesi de paper.El pH més utilitzat és 8,6BEl tampó arbital es tria normalment dins del rang de 0,05 mol/L a 0,09 mol/L.En seleccionar la concentració, es fa una determinació preliminar.Per exemple, si la longitud de la tira de membrana entre els elèctrodes de la cambra d'electroforesi és de 8-10 cm, es requereix una tensió de 25 V per centímetre de longitud de membrana i la intensitat de corrent hauria de ser de 0,4-0,5 mA per centímetre d'amplada de membrana.Si aquests valors no s'assoleixen o superen durant l'electroforesi, s'ha d'augmentar o diluir la concentració del tampó.
Una concentració de tampó excessivament baixa donarà lloc a un moviment ràpid de les bandes i un augment de l'amplada de banda.D'altra banda, una concentració de tampó excessivament alta alentirà la migració de la banda, dificultant la distinció de determinades bandes de separació.
Cal tenir en compte que en l'electroforesi de membrana d'acetat de cel·lulosa, una part important del corrent es condueix a través de la mostra, la qual cosa genera una quantitat considerable de calor.De vegades, la concentració de tampó escollida es pot considerar adequada.No obstant això, en condicions d'augment de la temperatura ambiental o quan s'utilitza una tensió més alta, l'evaporació de l'aigua a causa de la calor pot intensificar-se, donant lloc a una concentració de tampó excessivament alta i fins i tot fent que la membrana s'assequi.
Volum de mostra
En l'electroforesi de membrana d'acetat de cel·lulosa, la quantitat de volum de mostra està determinada per diversos factors, incloses les condicions d'electroforesi, les propietats de la mostra en si, els mètodes de tinció i les tècniques de detecció.Com a principi general, com més sensible sigui el mètode de detecció, més petit pot ser el volum de mostra, cosa que és avantatjosa per a la separació.Si el volum de la mostra és excessiu, és possible que els patrons de separació electroforètica no siguin clars i la tinció també pot consumir molt de temps.Tanmateix, quan s'analitzen quantitativament les bandes tacades separades mitjançant mètodes de detecció colorimètrics d'elució, el volum de la mostra no hauria de ser massa petit, ja que pot donar lloc a valors d'absorbància més baixos per a determinats components, donant lloc a majors errors en el càlcul del seu contingut.En aquests casos, el volum de mostra s'ha d'augmentar adequadament.
Normalment, el volum de mostra afegit a cada centímetre de la línia d'aplicació de la mostra oscil·la entre 0,1 i 5 μL, equivalent a una quantitat de mostra de 5 a 1000 μg.Per exemple, en l'anàlisi rutinària d'electroforesi de proteïnes sèriques, el volum de mostra afegit a cada centímetre de la línia d'aplicació generalment no supera 1 μL, equivalent a 60 a 80 μg de proteïna.Tanmateix, quan s'analitzen lipoproteïnes o glicoproteïnes mitjançant el mateix mètode d'electroforesi, el volum de la mostra s'ha d'augmentar corresponentment.
En conclusió, s'ha de seleccionar el volum de mostra més adequat en funció de condicions específiques mitjançant una sèrie d'experiments preliminars.
Selecció de la solució de tinció
Les bandes separades en l'electroforesi de membrana d'acetat de cel·lulosa es tenyeixen normalment abans de la detecció.Els diferents components de la mostra requereixen diferents mètodes de tinció, i els mètodes de tinció adequats per a l'electroforesi de membrana d'acetat de cel·lulosa poden no ser del tot aplicables al paper de filtre.
Hi ha tres principis principals per triar la solució de tinciómembrana d'acetat de cel·lulosa.En primer lloc,Els colorants solubles en aigua s'han de preferir als colorants solubles en alcohol per evitar la contracció i la deformació de la membrana causades per la solució de tinció d'aquesta última.Després de la tinció, és important esbandir la membrana amb aigua i minimitzar la durada de la tinció.En cas contrari, la membrana es pot arrissar o encongir, cosa que afectaria la detecció posterior.
En segon lloc, és preferible seleccionar colorants amb una forta afinitat per a la tinció per a la mostra.En l'electroforesi de membrana d'acetat de cel·lulosa de proteïnes sèriques, l'amino negre 10B s'utilitza habitualment a causa de la seva forta afinitat de tinció per diversos components de proteïnes sèriques i la seva estabilitat.
En tercer lloc, s'han de triar colorants de qualitat fiable.Alguns colorants, tot i tenir el mateix nom, poden contenir impureses que donen lloc a un fons especialment fosc després de la tinció.Això pot fins i tot difuminar les bandes originalment ben separades, cosa que fa que sigui difícil de distingir.
Finalment, l'elecció de la concentració de la solució de tinció és important.Teòricament, podria semblar que una concentració més alta de solució de tinció conduiria a una tinció més completa dels components de la mostra i a millors resultats de tinció.No obstant això, aquest no és el cas.L'afinitat d'unió entre els components de la mostra i el colorant té un cert límit, que no augmenta amb l'augment de la concentració de la solució de tinció.Al contrari, una concentració de solució de tinció excessivament alta no només malgasta el colorant sinó que també dificulta l'aconseguiment d'un fons clar.A més, quan la intensitat del color arriba a un determinat valor màxim, la corba d'absorbància del colorant no segueix una relació lineal, especialment en mesures quantitatives. En l'electroforesi de membrana d'acetat de cel·lulosa, la concentració de la solució de tinció és generalment inferior a la que s'utilitza en l'electroforesi del paper.
Detalls per saber sobre Beijing Liuyi Biotechnology's membrana d'acetat de cel·lulosatanc d'electroforesi i la seva aplicació d'electroforesi, visiteu aquí:
lExperiment per separar la proteïna sèrica mitjançant la membrana d'acetat de cel·lulosa
lElectroforesi de membrana d'acetat de cel·lulosa
Si teniu algun pla de compra dels nostres productes, no dubteu a posar-vos en contacte amb nosaltres.Podeu enviar-nos un missatge al correu electrònic[correu electrònic protegit]o[correu electrònic protegit], o truca'ns al +86 15810650221 o afegeix Whatsapp +86 15810650221 o Wechat: 15810650221.
Referència:Electroforesi (Segona edició) del Sr. Li
Hora de publicació: juny-06-2023