L'electroforesi en gel és un dels principals mètodes utilitzats en biologia molecular per a l'anàlisi d'ADN.Aquest mètode consisteix en la migració de fragments d'ADN a través d'un gel, on es separen en funció de la mida o la forma.Tanmateix, heu trobat mai algun error durant els vostres experiments d'electroforesi, com ara bandes untades al gel d'agarosa o cap bandes al gel?Quina podria ser la causa d'aquests errors?
Els nostres tècnics han resumit aquí un parell de solucions de problemes per a la vostra referència.
1. Bandes untades sobre gel d'agarosa
●L'ADN es va degradar.Eviteu la contaminació per nucleases.
● El tampó d'electroforesi no és fresc.Després de l'ús repetit del tampó d'electroforesi, la força iònica disminueix i el seu valor de pH augmenta, de manera que la capacitat del tampó es debilita, la qual cosa afecta l'efecte d'electroforesi.Es recomana substituir el tampó d'electroforesi amb freqüència.
● Es van utilitzar condicions d'electroforesi inadequades.No permeteu que la tensió superi els 20 V/cm i mantingueu una temperatura <30 °C durant l'electroforesi.Per a l'electroforesi de cadena d'ADN gegant, la temperatura hauria de ser <15 ° C. Comproveu que el tampó d'electroforesi tingui prou capacitat de tampó.
● S'ha carregat massa ADN al gel.Disminuir la quantitat d'ADN.
● Massa sal a l'ADN.Utilitzeu la precipitació d'etanol per eliminar l'excés de sals de manera avançada.
● L'ADN estava contaminat amb proteïnes.Utilitzeu extraccions de fenol per eliminar proteïnes de manera avançada.
● L'ADN es va desnaturalitzar.No escalfeu abans de l'electroforesi.Diluir l'ADN en tampó amb NaCl 20 mM.
2. Anomalies migració de la banda d'ADN
● Renaturació del lloc COS del fragment λHind III.Escalfeu l'ADN durant 5 minuts a 65 ° C abans de l'electroforesi i després refredeu-lo a la unitat de gel durant 5 minuts.
● Es van utilitzar condicions d'electroforesi inadequades.No permeteu que la tensió superi els 20 V/cm i mantingueu una temperatura <30 °C durant l'electroforesi.Comproveu que la memòria intermèdia d'electroforesi té prou capacitat.
● L'ADN es va desnaturalitzar.No escalfeu abans de l'electroforesi.Diluir l'ADN en tampó amb NaCl 20 mM.
3. Bandes d'ADN tènues o sense sobre gel d'agarosa
● Hi havia poca quantitat o concentració d'ADN carregat al gel.Augmentar la quantitat d'ADN.L'electroforesi en gel de poliacrilamida és lleugerament més sensible que l'electroforesi d'agarosa i la càrrega de la mostra es pot reduir adequadament.
● L'ADN es va degradar.Eviteu la contaminació per nucleases.
● L'ADN es va sotmetre a electroforesi del gel.Fes l'electroforesa del gel durant menys temps, utilitza un voltatge més baix o utilitza un gel per cent més alt.
● Es va utilitzar una font de llum W inadequada per a la visualització de l'ADN tacat amb bromur d'etidi.Utilitzeu una llum W de longitud d'ona curta (254 nm) per a una major sensibilitat.
4. Falten bandes d'ADN
●L'ADN de mida petita es va electroforitzar del gel.Fes l'electroforesa del gel durant menys temps, utilitza un voltatge més baix o utilitza un gel per cent més alt.
● Difícil de distingir les bandes d'ADN de molecular semblant.Augmenteu el temps d'electroforesi i comproveu la concentraciódel gel per assegurar-se que el percentatge de gel s'utilitza correctament.
● L'ADN es va desnaturalitzar.No escalfeu abans de l'electroforesi.Diluir l'ADN en tampó amb NaCl 20 mM.
● Les cadenes d'ADN són enormes i l'electroforesi convencional en gel no és adequada.Anàlisi d'electroforesi en gel de pols.Quins altres problemes has tingut amb l'electroforesi en gel d'agarosa?Investigarem més sobre guies en el futur.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) és una empresa especialitzada que se centra en productes relacionats amb l'electroforesi a la Xina.La seva història comença l'any 1970 quan la Xina encara no havia entrat en el temps de reforma i obertura.Durant anys de desenvolupament, Liuyi Bitotech té la seva pròpia marca, que es coneix com la marca Liuyi al mercat nacional de productes d'electroforesi.
La marca Liuyi té més de 50 anys d'història a la Xina i l'empresa pot oferir productes estables i d'alta qualitat a tot el món.A través d'anys de desenvolupament, és digne de la vostra elecció!
Les cèl·lules d'electroforesi horitzontals (tancs/cambres) de Liuyi Biotech són d'alta qualitat amb un bon aspecte.Amb diferents mides de safates de gel, poden satisfer els vostres diferents requisits experimentals.Tenim el nostre propi equip tècnic i fàbrica.Des del disseny fins a la fabricació, de les matèries primeres a les peces clau, podem controlar tot el procés.La sèrie DYCP 31 és per a l'electroforesi d'ADN, que són modelsDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, iDYCP-31E.Les diferències entre ells són les mides i el preu del gel.Oferim productes de mida completa per als nostres clients.El modelDYCP-32Cpot fer el gel més gran de 250 mm * 250 mm.
Mentrestant, recomanem la nostra font d'alimentació d'electroforesiDYY-6C,DYY-6DiDYY-10Cper a les nostres cèl·lules d'electroforesi (tancs/cambres) sèries DYCP-31 i 32.
Si voleu més informació sobre els productes, visiteu aquest lloc web per obtenir-ne més informació i contacteu amb nosaltres per correu electrònic per fer-nos saber què voleu i veure si podem oferir-vos les solucions.
Per obtenir més informació sobre nosaltres, poseu-vos en contacte amb nosaltres per correu electrònic[correu electrònic protegit], [correu electrònic protegit].
Hora de publicació: maig-09-2022