Què és l'electroforesi en gel de poliacrilamida?

Electroforesi en gel de poliacrilamida

L'electroforesi en gel és una tècnica fonamental als laboratoris de totes les disciplines biològiques, que permet la separació de macromolècules com ADN, ARN i proteïnes. Els diferents mitjans i mecanismes de separació permeten separar subconjunts d'aquestes molècules de manera més eficaç mitjançant l'explotació de les seves característiques físiques. Per a les proteïnes en particular, l'electroforesi en gel de poliacrilamida (PAGE) és sovint la tècnica escollida.

La PAGE és una tècnica que separa macromolècules com les proteïnes en funció de la seva mobilitat electroforètica, és a dir, la capacitat dels analits de desplaçar-se cap a un elèctrode de càrrega oposada. A PAGE, això ve determinat per la càrrega, la mida (pes molecular) i la forma de la molècula. Els analits es mouen a través dels porus formats en gel de poliacrilamida. A diferència de l'ADN i l'ARN, les proteïnes varien en càrrega segons els aminoàcids incorporats, que poden influir en el seu funcionament. Les cordes d'aminoàcids també poden formar estructures secundàries que afecten la seva mida aparent i, en conseqüència, com poden moure's pels porus. Per tant, de vegades pot ser desitjable desnaturalitzar les proteïnes abans de l'electroforesi per linearitzar-les si es requereix una estimació més precisa de la mida.

PÀGINA SDS

L'electroforesi en gel de poliacrilamida amb dodecil sulfat de sodi és una tècnica utilitzada per separar molècules de proteïnes de masses de 5 a 250 kDa. Les proteïnes es separen únicament en funció del seu pes molecular. El dodecilsulfat de sodi, un tensioactiu aniònic, s'afegeix en la preparació de gels que emmascara les càrregues intrínseques de les mostres de proteïnes i els dóna una relació càrrega/massa similar. En paraules senzilles, desnaturalitza les proteïnes i els dóna una càrrega negativa.

PÀGINA nativa

La PAGE nativa és una tècnica que utilitza gels no desnaturalitzats per a la separació de proteïnes. A diferència de SDS PAGE, no s'afegeix cap agent desnaturalitzant en la preparació de gels. Com a resultat, la separació de proteïnes té lloc en funció de la càrrega i la mida de les proteïnes. En aquesta tècnica, la conformació, el plegament i les cadenes d'aminoàcids de les proteïnes són els factors dels quals depèn la separació. Les proteïnes no es fan malbé en aquest procés i es poden recuperar després de la finalització de la separació.

Com funciona l'electroforesi en gel de poliacrilamida (PAGE)?

El principi bàsic de PAGE és separar els analits fent-los passar pels porus d'un gel de poliacrilamida mitjançant un corrent elèctric. Per aconseguir-ho, es polimeritza una barreja d'acrilamida-bisacrilamida (poliacrilamida) mitjançant l'addició de persulfat d'amoni (APS). La reacció, que està catalitzada per la tetrametiletilendiamina (TEMED), forma una estructura de xarxa amb porus a través dels quals es poden moure els analits (figura 2). Com més gran sigui el percentatge d'acrilamida total inclosa en el gel, menor serà la mida dels porus, per tant més petites seran les proteïnes que podran passar. La proporció d'acrilamida a bisacrilamida també afectarà la mida dels porus, però sovint es manté constant. Les mides de porus més petites també redueixen la velocitat a la qual les proteïnes petites poden moure's pel gel, millorant la seva resolució i evitant que s'esgotin ràpidament al tampó quan s'aplica el corrent.

Equips per a l'electroforesi en gel de poliacrilamida

Cèl·lula d'electroforesi en gel (tanc/cambra)
El dipòsit de gel per a l'electroforesi en gel de poliacrilamida (PAGE) és diferent del dipòsit de gel d'agarosa. El dipòsit de gel d'agarosa és horitzontal, mentre que el dipòsit PAGE és vertical. Mitjançant una cèl·lula d'electroforesi vertical (tanc/cambra), s'aboca un gel prim (normalment 1,0 mm o 1,5 mm) entre dues plaques de vidre i es munta de manera que la part inferior del gel quedi submergida en un tampó en una cambra i la part superior es submergirà en un tampó. en una altra cambra. Quan s'aplica corrent, una petita quantitat de tampó migra a través del gel de la cambra superior a la cambra inferior. Amb pinces fortes per garantir que el muntatge es mantingui en una posició vertical, l'equip facilita els córrer ràpids de gel amb un refredament uniforme que resulta en bandes diferents.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) fabrica una gamma de mides de cel·les d'electroforesi en gel de poliacrilamida (tancs/cambres). Els models DYCZ-20C i DYCZ-20G són cèl·lules d'electroforesi vertical (tancs/cambres) per a l'anàlisi de seqüenciació d'ADN. Algunes de les cèl·lules d'electroforesi vertical (tancs/cambres) són compatibles amb el sistema de blotting, com el model DYCZ-24DN, DYCZ-25D i DYCZ-25E, són compatibles amb el sistema Western Blotting model DYCZ-40D, DYCZ-40G i DYCZ-40F, que s'utilitzen per transferir la molècula de proteïna del gel a la membrana. Després de l'electroforesi SDS-PAGE, Western Blotting és una tècnica per detectar una proteïna específica en una barreja de proteïnes. Podeu triar aquests sistemes de borrat segons els requisits experimentals.

Font d'alimentació d'electroforesi
Per proporcionar l'electricitat per fer funcionar el gel, necessitareu una font d'alimentació d'electroforesi. A Liuyi Biotechnology oferim una gamma de fonts d'alimentació d'electroforesi per a totes les aplicacions. El model DYY-12 i DYY-12C amb una tensió i un corrent alts estables poden complir amb l'electroforesi d'alta tensió. Té la funció de suport, cronometratge, VH i aplicació pas a pas. Són ideals per a l'aplicació d'electroforesi de seqüenciació d'ADN i IEF. Per a l'aplicació general d'electroforesi de proteïnes i ADN, tenim el model DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, etc., que també són fonts d'alimentació de venda calenta amb cèl·lules d'electroforesi (tancs/cambres). Aquests es poden utilitzar per a aplicacions d'electroforesi de mitjana i baixa tensió, com ara l'ús del laboratori escolar, el laboratori hospitalari, etc. Més models per a fonts d'alimentació, visiteu el nostre lloc web.

La marca Liuyi té més de 50 anys d'història a la Xina i l'empresa pot oferir productes estables i d'alta qualitat a tot el món. A través d'anys de desenvolupament, és digne de la vostra elecció!

Per obtenir més informació sobre nosaltres, poseu-vos en contacte amb nosaltres per correu electrònic[correu electrònic protegit] or [correu electrònic protegit].

Referències per a Què és l'electroforesi en gel de poliacrilamida?
1. Karen Steward PhD Electroforesi en gel de poliacrilamida, com funciona, variants de la tècnica i les seves aplicacions