Preparació d'un gel d'agarosa per a l'electroforesi

Preparació de gel d'agarosa per a l'electroforesi

Nota: porteu sempre guants d'un sol ús!

Instruccions pas a pas

Pesatge d'agarosa en pols:ues paper de pesar i una balança electrònica per mesurar 0,3 g d'agarosa en pols (basat en un sistema de 30 ml).

Preparació del buffer TBST:pRepareu 30 ml de tampó 1x TBST en un matràs Erlenmeyer de 100 ml.

Dissolució de pols d'agarosa:pintroduïu la pols d'agarosa al tampó TBST i agiteu bé.Posa'lsal microones i escalfeu (normalment durant 50 segons, cobert amb paper d'alumini) fins que es dissolgui completament.

Refredament i addició de nucleases:uUtilitzeu guants per treure la mescla del microones i deixeu-la refredar una mica en aigua freda fins que estigui calenta (uns 60°C). Afegiu 2 µl de nucleasa (substitut Eb) mentre s'agita per barrejar bé.

Preparació del motlle de gel:

• Cmagre i assecar elsafata de gel i dispositiu de colada de geldel tanc d'electroforesi.
•  Pencaix el gelsafataal dipòsit interior i introduïu la pinta en una posició fixa.
• Barregeu la solució de gel d'agarosa, refredada a uns 65 °C i aboqueu-la amb cura a sobresafata de gelen eldispositiu de colada de gel, estenent-lo lentament fins a formar una capa de gel uniforme sobre la placa de vidre.
• Deixeu-ho reposar a temperatura ambient fins que el gel es solidifiqui completament.
• Traieu suaument la pinta verticalment i traieu la cinta.
• Col·loqueu el gelsafataal tanc d'electroforesi.

Important: Assegureu-vos que no hi hagi bombolles d'aire a la zona de les dents del pentinat. La superfície del líquid ha de ser llisa sense ondulacions.

Corrent el Gel

Carregant el gel

Després que el gel es solidifiqui, col·loqueu-lo al dipòsit d'electroforesi i aboqueu el tampó d'electroforesi fins que el gel estigui submergit.

Preparació de mostres

• Agafeu el marcador i el tampó de càrrega de la nevera.
• Afegiu 6 µl de tampó de càrrega a les mostres i barregeu bé.
• Amb una micropipeta, carregueu lentament les mostres als pous grans del gel (vigueu amb compte de no punxar el gel i no dispenseu tot el volum per evitar bombolles d'aire).
• Carregueu el marcador a qualsevol dels pous petits (recordeu la seva posició).

Inici de l'electroforesi

• Tapeu el dipòsit d'electroforesi i inicieu l'electroforesi immediatament després de carregar el gel.
• Establiu la tensió a 60-100V. Les mostres migraran de l'elèctrode negatiu (negre) a l'elèctrode positiu (vermell).
• Una tensió més alta escurça el rang de separació efectiu del gel d'agarosa.
• Atureu l'electroforesi quan el colorant blau de bromofenol arribi a uns 1 cm de la vora inferior de la placa de gel.

Observació de resultats

Després de separar les bandes, aturar l'electroforesi, treure el gel i detectar-lo i fotografiar-lo directament.

Utilitzeu un sistema d'imatge en gel per fotografiar i observar les bandes (comproveu si hi ha bandes per al marcador o les mostres).

Després d'obtenir el mapa de la banda de gel, busqueu el marcador. A partir del marcador, podeu determinar les bandes objectiu!

Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) fa més de 50 anys que fabriquen productes d'electroforesi. Presentem aquí els nostres sistemes d'electroforesi horitzontalgel d'agarosaelectroforesi.Triasistemes d'electroforesi horitzontalde Beijing liuyi per al vostre experiment d'electroforesi en gel per ajudar a la vostra investigació en la indústria de la biotecnologia.

Oferim diferents models de dipòsits d'electroforesi horitzontals per a la colada i el funcionament petitagarosagels fins a gransagarosagels

Guia de selecció de la unitat d'electroforesi en gel immers horitzontal

Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) s'ha especialitzat en la fabricació d'instruments d'electroforesi durant més de 50 anys amb el nostre propi equip tècnic professional i centre d'R + D. Tenim una línia de producció fiable i completa, des del disseny fins a la inspecció i el magatzem, així com suport de màrqueting. Els nostres productes principals són la cèl·lula d'electroforesi (tanc/cambra), la font d'alimentació d'electroforesi, el transil·luminador LED blau, el transil·luminador UV, el sistema d'anàlisi i imatge de gel, etc.

Si teniu algun pla de compra dels nostres productes, no dubteu a posar-vos en contacte amb nosaltres. Podeu enviar-nos un missatge al correu electrònic[correu electrònic protegit]o[correu electrònic protegit], o truca'ns al +86 15810650221 o afegeix Whatsapp +86 15810650221 o Wechat: 15810650221.

Escaneja el codi QR per afegir-lo a Whatsapp o WeChat.