Introducció
L'electroforesi en gel és una tècnica fonamental en biologia molecular, molt utilitzada per a la separació de proteïnes, àcids nucleics i altres macromolècules. El control adequat del volum de la mostra, la tensió i el temps d'electroforesi és crucial per aconseguir resultats precisos i reproduïbles.El nostre company de laboratori ofereixmillors pràctiques per gestionar aquests paràmetres durant l'electroforesi en gel SDS-PAGE.
Productes d'electroforesi en gel de Beijing Liuyi Biotechnology
Volum de mostra: assegurant la coherència
Quan es realitza l'electroforesi SDS-PAGE, el volum de la mostra és un factor clau que pot afectar significativament la resolució dels resultats. En general, es recomana carregar 10 µl de proteïna total per pou. Per garantir la consistència i evitar la difusió de la mostra entre els pous adjacents, és important carregar un volum igual de tampó de càrrega 1x en qualsevol pou buit. Aquesta precaució ajuda a evitar la propagació de mostres als carrils veïns, que es pot produir si el pou es deixa buit.
Abans de carregar les mostres, comenceu sempre afegint un marcador de pes molecular a un pou. Això permet identificar fàcilment les mides de proteïnes després de l'electroforesi.
Control de voltatge: equilibri entre velocitat i resolució
La tensió aplicada durant l'electroforesi afecta directament tant la velocitat a la qual les mostres migren a través del gel com la resolució de la separació. Per a SDS-PAGE, s'aconsella començar amb una tensió baixa d'uns 80V. Aquesta baixa tensió inicial permet que les mostres migrin lentament i uniformement, concentrant-les en una banda nítida a mesura que entren al gel de separació.
Un cop les mostres hagin entrat completament al gel de separació, la tensió es pot augmentar a 120 V. Aquest voltatge més alt accelera la migració, assegurant que les proteïnes es separen de manera eficient segons el seu pes molecular. És essencial controlar el progrés del front del colorant blau de bromofenol, que indica la finalització de l'electroforesi. Per a gels amb una concentració del 10-12%, normalment n'hi ha prou de 80-90 minuts; no obstant això, per als gels del 15%, és possible que hàgiu d'allargar lleugerament el temps d'execució.
Gestió del temps: saber quan parar
El temps és un altre factor crític en l'electroforesi en gel. Fer funcionar el gel durant un període massa llarg o massa curt pot conduir a una separació subòptima. La migració del colorant blau de bromofenol és un indicador útil: quan arriba al fons del gel, normalment és el moment d'aturar la carrera. Per als gels estàndard, com ara el 10-12%, una durada d'electroforesi d'uns 80-90 minuts normalment és adequada. Per a gels amb percentatges més alts, com el 15%, el temps d'execució s'hauria d'allargar per garantir la separació completa de les proteïnes.
Gestió de buffers: reutilització i preparació de buffers
El tampó d'electroforesi es pot reutilitzar 1-2 vegades, depenent de les condicions específiques del vostre laboratori. No obstant això, per obtenir resultats òptims, es recomana preparar un tampó 10x fresc i diluir-lo just abans d'utilitzar-lo. Això garanteix que el tampó mantingui la seva eficàcia, donant lloc a resultats d'electroforesi més fiables.
Productes d'electroforesi en gel de Beijing Liuyi Biotechnology
Si controleu acuradament el volum de la mostra, la tensió i el temps d'electroforesi, podeu millorar significativament la precisió i la reproductibilitat dels resultats de l'electroforesi en gel. La implementació d'aquestes bones pràctiques en el vostre treball de laboratori us ajudarà a aconseguir bandes més clares i diferents, donant lloc a millors dades per a l'anàlisi posterior.
Si teniu més bons mètodes per optimitzar l'experiment d'electroforesi en gel, us convidem a parlar amb nosaltres!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) s'ha especialitzat en la fabricació d'instruments d'electroforesi durant més de 50 anys amb el nostre propi equip tècnic professional i centre d'R + D. Tenim una línia de producció fiable i completa, des del disseny fins a la inspecció i el magatzem, així com suport de màrqueting. Els nostres productes principals són la cèl·lula d'electroforesi (tanc/cambra), la font d'alimentació d'electroforesi, el transil·luminador LED blau, el transil·luminador UV, el sistema d'anàlisi i imatge de gel, etc.
Si teniu algun pla de compra dels nostres productes, no dubteu a posar-vos en contacte amb nosaltres. Podeu enviar-nos un missatge al correu electrònic[correu electrònic protegit]o[correu electrònic protegit], o truca'ns al +86 15810650221 o afegeix Whatsapp +86 15810650221 o Wechat: 15810650221.
Escaneja el codi QR per afegir-lo a Whatsapp o WeChat.
Hora de publicació: 20-agost-2024