Principi
L'electroforesi de pel·lícula d'acetat de cel·lulosa és un mètode d'electroforesi que utilitza una pel·lícula d'acetat de cel·lulosa com a suport. El fenomen en què les partícules carregades es mouen cap a l'elèctrode oposat sota l'acció del camp elèctric s'anomena electroforesi. Com que cada proteïna té un punt isoelèctric específic, si es col·loca una proteïna en una solució amb un pH inferior al seu punt isoelèctric, la proteïna es carregarà positivament i es mourà cap a l'elèctrode negatiu. Al contrari, es mou al pol positiu. Com que la velocitat de les molècules de proteïnes que es mouen en un camp elèctric està relacionada amb la seva càrrega, la forma i la mida de les molècules, diferents proteïnes es poden separar mitjançant electroforesi. El sèrum conté una varietat de proteïnes, totes amb punts isoelèctrics a pH 7,5 o menys. Quan el sèrum es col·loca en un tampó de pH 8,6 per fer l'electroforesi, totes les proteïnes sèriques estan carregades negativament i es mouran cap al costat positiu del camp elèctric. Com que diverses proteïnes sèriques tenen diferents càrregues al mateix pH, les partícules moleculars tenen una mida diferent i, per tant, la velocitat de migració és diferent i es separen per electroforesi. Els punts isoelèctrics i els pesos moleculars de les proteïnes sèriques es mostren a la taula següent:
| Proteïna | Punts isoelèctrics (PI) | Pes molecular |
| Albúmina | 4,88 | 69.000 |
| α1-gloulina | 5.00 | 200 000 |
| α2-gloulina | 5.06 | 300.000 |
| β-gloulina | 5.12 | 9 000 ~ 150 000 |
| γ-gloulina | 6,85~7,50 | 156 000 ~ 300 000 |
L'experiment consisteix a separar diferents proteïnes en sèrum sanguini amb membrana d'acetat de cel·lulosa (abreviatura CAM) com a suport de suport. CAM és una mena de llaços d'escumaepel·lícula amb un bon uniforme i el gruix és de 0,1 mm-1,5 mm, que té una certa absorció d'aigua.
Materials, instruments i reactius per a l'electroforesi CAM
Mostres:sèrum de sang humana sana
Instrument:font d'alimentació DYY-6C, tanc d'electroforesi DYCP-38C, càrrega de mostra superior WD-9404
Els reactius
1) Membrana d'acetat de cel·lulosa 7X9cm
2) Solució tampó de barbitol PH 8,6 (forces iònica 0,05-0,09, és un temps de 0,06 tid): preneu 1,84 g d'àcid dietil barbitúric i, a continuació, preneu 1,03 g de pentobarbital dietil sòdic, afegiu una mica d'aigua destil·lada perquè es dissolgui i feu fins a 1000 ml;
3) Taca: Ponceau S 0,2 g, tricloroacètic 3 g, afegir 100 ml d'aigua destil·lada;
4) TBS/T o PBS/T: 45 ml d'etanol al 95%, 5 ml d'àcid acètic glacial, afegiu 50 ml d'aigua destil·lada;
5) Solució de neteja: 70 ml d'etanol anhidre, 30 ml d'àcid acètic glacial.
Experimentació Method
1) Prepareu la membrana: submergiu la membrana a la solució tampó de barbitol 30min-8h, traieu-la, traieu la solució addicional amb paper absorbent.
2) Càrrega de mostres: distingiu el costat aspre i el costat llis de la membrana i marqueu una línia a una distància d'1,5 cm fins a l'extrem superior del costat aspre. Carregueu mostres amb una eina de càrrega de mostres superior al costat aspre. Nota: Les mostres s'han de carregar a la part rugosa de la membrana. Després que les mostres de sèrum estiguin completament penetrades a la membrana, gireu la membrana, poseu el costat aspre (amb mostres) cap avall al dipòsit i l'extrem amb les mostres es col·loca a l'elèctrode negatiu.
3) Electroforesi: engegueu la font d'alimentació, 0,4～Membrana de 0,6 m A/cm, el temps de funcionament és de 30-45 min. Després d'executar l'electroforesi, apagueu l'alimentació.
4) Taca i neteja: traieu la membrana del dipòsit i submergiu-lait a la solució de colorant durant 5 minuts, i després netegeu-lo amb la solució de neteja una i altra vegada durant 3-4 vegades fins que el color de fons sigui clar. Les proteïnes sèriques s'han de mostrar a les bandes, i normalment hi ha cinc zones, formen l'extrem superior de la línia marcada, albúmina, α1-gloulina, α2-gloulina, β-gloulina, γ-gloulina.
5) Conservació: posar l'electroforesi en secbandaen solució de neteja durant 10-15 minuts, i després traieu-lo i enganxeu-lo a un vidre net, després que s'assequi, es convertirà en una pel·lícula transparentbanda.
ExperimentaResultat
L'efecte de separació de les mostres de sèrum és bo i no hi ha cap fenomen de cua de banda. La repetibilitat dels resultats varia segons els procediments de prova i els mètodes de l'experimentador, i la repetibilitat és alta.
Conclusió
El sistema ràpid de detecció d'electroforesi clínica (Tanc d'electroforesiDYCP-38C,font d'alimentacióDYY-6C i càrrega de mostra superior WD-9404) produït pel nostreempresa Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdcompleix els requisits experimentals,iels resultats són reproduïbles, senzills i ràpids, adequats per al'ensenyamentinvestigació.
Pequín LiuyiBiotechnology Co., Ltd s'especialitza en la fabricació de productes d'electroforesi per a la indústria de les ciències de la vida, queté més de 50 anys d'història a la Xina i l'empresa pot oferir productes estables i d'alta qualitat a tot el món. A través d'anys de desenvolupament, és digne de la vostra elecció!
Ara estem buscant socis, tant el tanc d'electroforesi OEM com els distribuïdors són benvinguts.
Per obtenir més informació sobre nosaltres, poseu-vos en contacte amb nosaltres per correu electrònic[correu electrònic protegit]o[correu electrònic protegit].
Hora de publicació: 14-nov-2022