Assaig de cometes: una tècnica sensible per detectar danys i reparar l'ADN

L'assaig de cometa (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) és una tècnica sensible i ràpida que s'utilitza principalment per detectar danys i reparar l'ADN en cèl·lules individuals. El nom "Comet Assay" prové de la forma característica de cometa que apareix als resultats: el nucli de la cèl·lula forma el "cap", mentre que els fragments d'ADN danyats migren, creant una "cua" semblant a un cometa.

Principi

El principi de l'assaig del cometa es basa en la migració de fragments d'ADN en un camp elèctric. L'ADN intacte roman dins del nucli cel·lular, mentre que l'ADN danyat o fragmentat migra cap a l'ànode, formant la "cua" del cometa. La longitud i la intensitat de la cua són directament proporcionals a l'extensió del dany a l'ADN.

Procediment

1. Preparació cel·lular: Les cèl·lules a provar es barregen amb agarosa de baix punt de fusió i s'estenen sobre portaobjectes de microscopi per formar una capa uniforme.
2. Lisi cel·lular: Les diapositives es submergeixen en una solució de lisi per eliminar la membrana cel·lular i la membrana nuclear, deixant al descobert l'ADN.
3. Electroforesi: Les diapositives es col·loquen en una cambra d'electroforesi en condicions alcalines o neutres. Els fragments d'ADN danyats migren cap a l'elèctrode positiu sota la influència del camp elèctric.
4. Tinció: Després de l'electroforesi, les diapositives es tenyeixen amb un colorant fluorescent (per exemple, bromur d'etidi) per visualitzar l'ADN.
5. Anàlisi microscòpica: Mitjançant un microscopi de fluorescència o programari especialitzat, s'analitzen les formes dels cometes i es mesuren paràmetres com la longitud i la intensitat de la cua.

Imatge de biorender

Anàlisi de dades

Els resultats de l'assaig Comet s'avaluen en funció de diversos paràmetres clau:

• Longitud de la cua: Representa la distància que migra l'ADN, indicant l'extensió del dany a l'ADN.
• Contingut d'ADN de la cua: El percentatge d'ADN que migra a la cua, sovint utilitzat com a mesura quantitativa del dany a l'ADN.
• Moment de la cua d'oliva (OTM): Combina tant la longitud de la cua com el contingut d'ADN de la cua per proporcionar una mesura més completa del dany a l'ADN.

Aplicacions

1. Estudis de genotoxicitat: L'assaig del cometa s'utilitza àmpliament per avaluar els efectes de les substàncies químiques, les drogues i la radiació sobre l'ADN cel·lular, el que el converteix en una eina clau per a les proves de genotoxicitat.
2. Toxicologia ambiental: Ajuda a analitzar l'impacte dels contaminants ambientals en l'ADN dels organismes, proporcionant informació sobre la seguretat dels ecosistemes.
3. Investigació mèdica i clínica: L'assaig del cometa s'utilitza per estudiar els mecanismes de reparació de l'ADN, el càncer i altres malalties relacionades amb l'ADN. També avalua l'impacte de les teràpies contra el càncer com la radioteràpia i la quimioteràpia en l'ADN.
4. Ciències de l'Alimentació i l'Agricultura: S'utilitza per avaluar la seguretat de pesticides, additius alimentaris i altres substàncies, i per estudiar els seus efectes tòxics en models animals.

Avantatges

• Alta sensibilitat: Capaç de detectar nivells baixos de dany a l'ADN.
• Operació senzilla: La tècnica és senzilla, la qual cosa la fa apta per a un cribratge d'alt rendiment.
• Aplicació àmplia: Es pot aplicar a diversos tipus de cèl·lules, incloses cèl·lules animals i vegetals.
• Reptes de quantificació: Tot i que ofereix dades qualitatives sobre danys a l'ADN, l'anàlisi quantitativa es basa en gran mesura en el programari i les tècniques d'anàlisi d'imatges.
• Condicions experimentals: Els resultats poden estar influenciats per factors com el temps d'electroforesi i el pH, que requereixen un control acurat de les condicions experimentals.

Limitacions

El Comet Assay és una eina inestimable en la investigació biomèdica, la ciència ambiental i el desenvolupament de fàrmacs a causa de la seva flexibilitat i alta sensibilitat per detectar danys i reparar l'ADN. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)ofereix una cambra d'electroforesi horitzontal per a l'assaig de cometes. Benvingut a contactar amb nosaltres per parlar sobre elAssaig de cometesprotocol.

Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) s'ha especialitzat en la fabricació d'instruments d'electroforesi durant més de 50 anys amb el nostre propi equip tècnic professional i centre d'R + D. Tenim una línia de producció fiable i completa, des del disseny fins a la inspecció i el magatzem, així com suport de màrqueting. Els nostres productes principals són la cèl·lula d'electroforesi (tanc/cambra), la font d'alimentació d'electroforesi, el transil·luminador LED blau, el transil·luminador UV, el sistema d'anàlisi i imatge de gel, etc.

Si teniu algun pla de compra dels nostres productes, no dubteu a posar-vos en contacte amb nosaltres. Podeu enviar-nos un missatge al correu electrònic[correu electrònic protegit]o[correu electrònic protegit], o truca'ns al +86 15810650221 o afegeix Whatsapp +86 15810650221 o Wechat: 15810650221.

Escaneja el codi QR per afegir-lo a Whatsapp o WeChat.