Preparació de la mostra iCarregant
A causa de l'ús d'un sistema tampó continu sense gel d'apilament en la majoria dels casos, les mostres haurien de tenir una concentració adequada i un volum petit. Utilitzeu apipetaafegir lentament la mostra, amb 5-10 μg per pou, per evitar una disminució important de la resolució. Quancarregant la mostra, la font d'alimentació s'ha d'apagar. La mostra ha de contenir un colorant indicador (0,025% blau de bromofenol o taronja) i sacarosa (10-15%) o glicerol (5-10%) per augmentar la seva densitat, concentrar la mostra i evitar la difusió. No obstant això, de vegades la sacarosa o el glicerol poden provocar bandes en forma d'U en els resultats de l'electroforesi, que es poden evitar utilitzant un 2,5% de Ficoll (polivinilpirrolidona).
Electroforesi
La tensió per a l'electroforesi és de 5-15 V/cm, generalment al voltant de 10 V/cm. Per a la separació de molècules grans, la tensió ha de ser inferior, normalment no superant els 5 V/cm.
Tinció
El bromur d'etidi (EB) de colorant fluorescent s'utilitza habitualment per a la tinció per observar bandes d'ADN en gel d'agarosa. L'EB pot inserir-se entre parells de bases de molècules d'ADN, fent que l'EB s'uneixi a l'ADN. L'absorció de llum ultraviolada de 260 nm per part de l'ADN es transfereix a EB, i l'EB lligat emet fluorescència a 590 nm a la regió vermell-taronja de l'espectre de llum visible. Tenir el gel en una solució de MgSO4 d'1 mmol/L durant 1 hora pot reduir la fluorescència de fons causada per l'EB no unit, facilitant la detecció de petites quantitats d'ADN.
El colorant EB té diversos avantatges: és fàcil d'utilitzar, no trenca els àcids nucleics, té una alta sensibilitat i pot tacar tant l'ADN com l'ARN. Es pot afegir EB a la mostra i fer un seguiment mitjançant l'absorció UV en qualsevol moment. Després de la tinció, l'EB es pot eliminar mitjançant extracció amb n-butanol.
Tanmateix, el colorant EB és un potent mutàgen i s'han de prendre precaucions, com ara portar guants de polietilè, durant la manipulació. La taronja d'acridina també és un colorant d'ús habitual perquè pot diferenciar entre àcids nucleics monocatenaris i bicatenaris (ADN, ARN). Presenta una fluorescència verda (530 nm) per als àcids nucleics de doble cadena i una fluorescència vermella (640 nm) per als àcids nucleics monocatenaris. A més, es poden utilitzar altres colorants com el blau de metilè, el verd de metilè i la quinolina B per a la tinció.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) s'ha especialitzat en la fabricació d'instruments d'electroforesi durant més de 50 anys amb el nostre propi equip tècnic professional i centre d'R + D. Tenim una línia de producció fiable i completa, des del disseny fins a la inspecció i el magatzem, així com suport de màrqueting. Els nostres productes principals són la cèl·lula d'electroforesi (tanc/cambra), la font d'alimentació d'electroforesi, el transil·luminador LED blau, el transil·luminador UV, el sistema d'anàlisi i imatge de gel, etc.
Ara estem buscant socis, tant el tanc d'electroforesi OEM com els distribuïdors són benvinguts.
Si teniu algun pla de compra dels nostres productes, no dubteu a posar-vos en contacte amb nosaltres. Podeu enviar-nos un missatge al correu electrònic[correu electrònic protegit]o[correu electrònic protegit], o truca'ns al +86 15810650221 o afegeix Whatsapp +86 15810650221 o Wechat: 15810650221.
Escaneja el codi QR per afegir-lo a Whatsapp o WeChat.
Hora de publicació: 20-12-2023