1. Classificació
L'electroforesi en gel es divideix en tipus verticals (inclosos gels de columna i gels de lloses) i tipus horitzontals (principalment gels de lloses) (figura 6-18). En general, la separació vertical és lleugerament superior a l'horitzontal, però la preparació de gel horitzontal té almenys quatre avantatges: hi ha suport sota tot el gel, permetent l'ús d'agarosa de baixa concentració; és possible preparar plaques de gel d'agarosa de diferents especificacions; la preparació del gel i la càrrega de mostres són més convenients; la cambra d'electroforesi és fàcil de construir i rendible. Com que l'electroforesi horitzontal es realitza amb la placa de gel d'agarosa completament submergida aproximadament 1 mm per sota de la superfície del tampó d'electroforesi, també s'anomena electroforesi submergida.
Tanc d'electroforesi DYCP-31DN per electroforesi en gel d'agarosa
2.Sistema buffer
En la separació d'àcids nucleics, la majoria dels sistemes adopten sistemes continus. Els tampons d'electroforesi utilitzats habitualment inclouen el tampó TBE (0,08 mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08mol/L àcid bòric, 0,0024mol/L EDTA) i THE (0,04mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol/L). acetat de sodi, tampó EDTA 0,0018mol/L). Aquests tampons es preparen generalment com a solucions d'emmagatzematge 10x i es dilueixen a la concentració requerida quan s'utilitzen. Les taxes de migració de l'ADN lineal i circular en gel d'agarosa varien segons el tampó utilitzat. En el tampó THE, la taxa de migració de l'ADN lineal és més gran que la de l'ADN circular, mentre que en el tampó TBE, és cert el contrari.
3.Preparació de Gel d'Agarosa
(1) Preparació de gel d'agarosa horitzontal
( a ) Prepareu la concentració requerida de gel d'agarosa mitjançant un tampó d'electroforesi 1x.
(b) Escalfeu l'agarosa fins a la dissolució completa, ja sigui en un bany d'aigua bullint, en un agitador magnètic o en un microones. Refredar la solució d'agarosa a 55 °C i afegir colorant de bromur d'etidi (EB) fins a una concentració final de 0,5 μg/ml.
(c) Segellar les vores de les plaques de vidre o acríliques amb una petita quantitat de gel d'agarosa, afegir una pinta i col·locar les dents de la pinta uns 0,5 ~ 1,0 mm per sobre de la placa.
(d) Aboqueu la solució de gel d'agarosa fosa contínuament al motlle de vidre o placa acrílica (el gruix depèn del volum de la mostra d'ADN), evitant la introducció de bombolles d'aire. Deixeu-ho solidificar de manera natural a temperatura ambient.
(e) Traieu amb cura la pinta després de la solidificació completa. Afegiu una quantitat adequada de tampó d'electroforesi al dipòsit de gel, assegurant-vos que la placa de gel estigui submergida aproximadament 1 mm per sota de la superfície del tampó d'electroforesi.
(2) Preparació de Gel d'Agarosa Vertical
(a) Traieu el greix o els residus de les plaques de vidre rentant-les amb etanol.
(b) Col·loqueu plaques separadores entre les preses davanteres i posteriors, alineeu les vores de les plaques separadores amb les preses davanteres i posteriors i fixeu-les amb pinces.
(c) Afegiu un 2% d'agarosa en un tampó 1x entre les vores de les plaques separadores per formar un tap d'agarosa d'1 cm d'alçada a la part inferior de la cambra de colada de gel.
(d) Aboqueu el gel d'agarosa fos a la concentració desitjada, preparat en tampó 1x, a la cambra de gel fins a 1 cm per sota de la part superior.
(e) Introduïu la pinta, evitant atrapar bombolles d'aire sota les dents de la pinta. De vegades, poden aparèixer arrugues a les dents de la pinta durant el refredament del gel d'agarosa; en aquests casos, només cal afegir una mica d'agarosa fosa a la part superior per solidificar-la.
(f) Traieu la pinta. Per evitar les fuites del tampó a la ranura de càrrega, segellar la connexió entre la placa de gel d'agarosa i la cambra d'electroforesi amb agarosa al 2% i afegir la quantitat necessària de tampó.
(g) Afegiu tampó d'electroforesi 1x a la cambra de gel.
(h) Carregueu amb cura les mostres d'ADN al gel d'agarosa sota el tampó.
Més informació sobre els coneixements bàsics sobre l'electroforesi en gel d'agarosa, compartirem la setmana vinent. Desitjo que aquesta informació sigui útil per al vostre experiment.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) s'ha especialitzat en la fabricació d'instruments d'electroforesi durant més de 50 anys amb el nostre propi equip tècnic professional i centre d'R + D. Tenim una línia de producció fiable i completa, des del disseny fins a la inspecció i el magatzem, així com suport de màrqueting. Els nostres productes principals són la cèl·lula d'electroforesi (tanc/cambra), la font d'alimentació d'electroforesi, el transil·luminador LED blau, el transil·luminador UV, el sistema d'anàlisi i imatge de gel, etc.
Ara estem buscant socis, tant el tanc d'electroforesi OEM com els distribuïdors són benvinguts.
Si teniu algun pla de compra dels nostres productes, no dubteu a posar-vos en contacte amb nosaltres. Podeu enviar-nos un missatge al correu electrònic[correu electrònic protegit]o[correu electrònic protegit], o truca'ns al +86 15810650221 o afegeix Whatsapp +86 15810650221 o Wechat: 15810650221.
Escaneja el codi QR per afegir-lo a Whatsapp o WeChat.
Hora de publicació: 07-12-2023